Zusammenfassung

1. Einleitung

2. Material und Methoden

2.1 Material

• 2.1.1 Chemikalien und Enzyme
• 2.1.2 Lösungen
• 2.1.3 Medien
• 2.1.4 Biologisches Material
• 2.1.5 cDNA-Populationen
• 2.1.6 Bakterien
• 2.1.7 Größenstandards
• 2.1.8 Analysesoftware

2.2 Methoden

• 2.2.1 Suppression Subtractive Hybridization (SSH)
• 2.2.1.1 Reinigung von cDNA über Säulenchromatographie
• 2.2.1.2 Restriktionsverdau und Restriktionsanalyse von Plasmid-DNA
• 2.2.1.3 NucleoTrap® -Aufreinigung
• 2.2.1.4 Adapter-Herstellung
• 2.2.1.5 Subtraktive Hybridisierung
• 2.2.2 DNA-Auftrennung mit Agarose-Gelelektrophorese
• 2.2.3 Klonierung und Transformation der PCR-Fragmente
• 2.2.4 Kolonie-PCR
• 2.2.5 Mini-Präparation von Plasmid-DNA und Dauerkultur-Platten
• 2.2.6 Southern-Transfer (Transfer von DNA auf Membrane)
• 2.2.7 Herstellung von radioaktiv markierten Sonden
• 2.2.8 Bestimmung der spezifischen Aktivität
• 2.2.9 Radioaktive Nachweismethode
• 2.2.10 Quantitative Auswertung radioaktiver Signale
• 2.2.11 Konzentrationbestimmung von DNA
• 2.2.12 DNA-Sequenzierung
• 2.2.13 Sequenzanalyse

3. Ergebnisse

3.1 Vorbereitung der cDNA zur Suppression Subtractive Hybridization (SSH)

• 3.1.1 Säulenaufreinigung der cDNA
• 3.1.2 Präparativer RsaI-Verdau der aufgereinigten cDNA
• 3.1.3 NucleoTrap® -Aufreinigung der verdauten cDNA-Fragmente

3.2 SSH-Suppression Subtractive Hybridization

• 3.2.1 Ligation der Adaptoren an die cDNA-Fragmente
• 3.2.2 Subtraktive Hybridisierung der cDNA-Populationen und Amplifikation (der entstandenen Fragmente)

3.3 Klonierung und Transformation der durch SSH erhaltenen cDNA-Fragmente

3.4 Southern-Blot-Analyse der durch SSH erhaltenen cDNA-Fragmente

• 3.4.1 Southern-Blot-Analyse
• 3.4.2 Quantitative Auswertung der Southern-Blots

3.5 Sequenzanalysen

3.6 Zusammenfassung der erhaltenen Daten

4 Diskussion

5 Literaturverzeichnis

6 Abkürzungsverzeichnis

Anhang